热门搜索:大学毕业论文 硕士毕业论文 博士毕业论文 硕士英语论文 硕士mba论文 无忧论文网

当前位置:无忧论文网 > 职称论文 > 硕士医学论文 >

甲状腺乳头状癌中BRAF T1799A基因突变与TGF-β的关联及对肿瘤预后的医学影响

  • 发布日期:2018-07-12
  • 责任编辑:lgg
  • 论文字数:0
  • 点击:
  • 论文编号:
  • 论文类型:
  • 论文价格:0
本文是一篇硕士医学论文,医学论文格式由以下6部分组成:论文题目;作者署名、工作单位和邮编;摘要(目的、方法、结果、结论);关健词;正文(资料与方法、结果、结论)参考文献。(以上内容来自百度百科)今天为大家推荐一篇硕士医学论文,供大家参考。
 
引 言
 
甲状腺肿瘤是较常见的内分泌肿瘤,在人群中的发病率为 4%-7% ,其中大部分为良性,有 5%-8%为恶性肿瘤[1]。流行病学资料显示,全球甲状腺癌的发病呈明显上升趋势,与内陆地区相比,沿海城市的甲状腺乳头状癌(papillary thyroidcarcinoma, PTC)患病率明显增高。前期在对我医院近 14 年来 690 例甲状腺癌的患病趋势分析后得出,PTC 占 81.74% (564/690),平均确诊年龄为 45.39 岁,其在甲状腺癌中的构成比也呈明显逐年递增趋势[2]。PTC 多呈非连续性多病灶,容易发生淋巴转移和肿瘤复发。因此 PTC 已经成为危害人类健康的常见的内分泌系统肿瘤。大部分 PTC 是由致癌信号途径激活导致的,RAS-RAF-有丝分裂原活化蛋白/细胞外信号调节激酶(MEK)-细胞外信号调节激酶(ERK)-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径的信号旁路是肿瘤基因变异的主要途径。此信号途径能够通过上调细胞增殖和分化的信号表达从而在癌症的发生和发展中起重要作用[3]。荟萃分析得出 BRAFT1799A 基因突变是 PTC 中最常见的分子缺陷[4],该基因编码 B 型有丝分裂原激活的蛋白激酶依赖性激酶的激酶,参与 MAPK 途径的信号传导[5]。BRAF T1799A 基因突变的患病率有地域和种族的差别[6],其发生率在 29%~83%[7-9],平均发生率 44%[4]。本研究组前期研究显示青岛地区 BRAF T1799A 基因突变率为 37.5%,略低于国外报道[10]。有研究表明,BRAF T1799A 突变与 PTC 发生淋巴结转移、术后复发、发生腺外浸润及肿瘤高分期密切相关[7,8,11,12]。前期研究也证实,BRAF T1799A 阳性者肿瘤浸润和肿瘤Ⅲ级以上分级发生率高于阴性患者,且该基因突变与预示临床预后不良的血小板源性生长因子(PDGF)的表达呈强相关性[10,13]。BRAF T1799A 基因突变影响PTC 生长方式及其临床预后,该基因突变可以作为一项的预后因子,但具体机制不详。
转化生长因子(transforming growth factor,TGF-β)是一类多功能蛋白质,可以影响多种细胞的生长、分化、凋亡及免疫调节等功能。TGF-β通过与细胞膜表面具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的受体 TβR 结合而激活其受体,并将信号放大并磷酸化细胞内受体调控的 pSmads 蛋白,形成复合体进入细胞核,与相关的转录因子调控靶基因的表达。TGF-β在肿瘤的发生、发展中具有双重作用[14]:在肿瘤发生的起始阶段扮演抑制者的角色,而在肿瘤进展期能够促进肿瘤细胞浸润、转移。体外实验表明[15],在正常甲状腺细胞中,TGF-β抑制细胞增殖,诱导凋亡;而在甲状腺癌细胞中 TGF-β表达增强,其促凋亡的作用基本丧失,而促分化、促浸润的作用占主导地位。BRAFT1799A 基因突变与 TGF-β异常表达之间的联系存在争议。无论是否发生 BRAF 基因变异,TGF-β在非局限性 PTC 中的表达较局限性肿瘤组织中明显升高[16]。钠/碘共同转运体(sodium/iodide symporter,NIS)主要存在于甲状腺滤泡细胞基底膜上,是非常重要的一种碘代谢相关因子。NIS 在碘的摄取与转运过程中发挥着重要的作用,它可促进碘的主动转运,使碘顺着电化学梯度从间质进入细胞内。Patel等证实[17],近期越来越多的研究者发现[18-22],在甲状腺癌中 NIS 的表达是下降的,认为甲状腺癌的摄碘缺陷在于 NIS 基因表达的减少或缺失。然而,也有学者提出另一种观点[23],即甲状腺癌组织的 NIS 是胞质型表达为主,靶向定位障碍造成摄碘功能受损,作为代偿 NIS 的表达量反而增加,但这种无效表达同样会造成细胞摄碘率的下降。甲状腺癌中NIS表达异常的机制涉及到癌细胞中某些相关基因的突变。Romei[24]等学者也证实,BRAF T1799A 基因突变与 TPO 及 NIS 基因的低表达相关联,并能够影响 NIS 基因的靶向定位,从而降低对放射性碘的敏感性。Riesco[25]等在体外实验证实, BRAF T1799A 基因突变可抑制 NIS 基因转录活性,干扰其在细胞膜上的定位,MEK 抑制剂不能缓解 BRAF 基因突变引起的 NIS 表达下调,由此说明 BRAFT1799A 基因突变并非通过 MAPK 通路影响 NIS。而阻断 TGF-β/Smad 信号通路后,NIS 的受抑制作用解除。而该团队的另一项研究表明[15],Smad 蛋白的抑制剂可使NIS 的表达量增加,该研究发现 BRAF 基因突变阳性的肿瘤中 TGF-β表达量明显高于突变阴性者,而 TGF-β表达量越高,而 NIS 表达量越低。本研究的第一部分旨在证实 BRAF T1799A 基因突变与 TGF-β之间的关联,二者是否共同作用于 NIS 而影响肿瘤预后。第二部分旨在研究 PTC 中 BRAF T1799A 基因突变对与 TGF-β相关的上皮间质转化的影响。
.........
 
第一部分 甲状腺乳头状癌BRAF T1799A基因突变与TGFβ表达对肿瘤预后的影响
 
1 前言
BRAF T1799A 基因突变是甲状腺乳头状癌常见的遗传学事件,是 MAPK 信号通路最强有力的启动者[26]。多数研究发现 BRAF T1799A 基因突变与高侵袭性的临床病理学因素及甲状腺癌的复发相关,在甲状腺癌的发生与发展中也有其重要意义[12,27,28]。Xing 等[12]揭示 BRAF T1799A 基因突变型 PTC 的细胞摄碘功能较野生型的差。发生 BRAF T1799A 基因突变的 PTC 中 NIS 表达降低且不能正常定位于滤泡细胞基底膜上[25],预示着对放射碘治疗效果差,从而影响肿瘤预后。TGF-β通过调节 Smad 通路中多项靶基因的表达而发挥作用[29],使正常的成纤维细胞的表型发生转化,使之迁移并侵袭肿瘤细胞[30]。TGF-β在多类肿瘤中表达增多[31],在甲癌中也呈过表达状态[32-34]。体外研究结果显示,甲癌细胞中 TGF-β表达量越高,而 NIS 表达量越低;给予 Smad 蛋白的抑制剂可使 NIS 的表达量增加;进一步研究表明,BRAF T1799A 基因突变可通过诱导 TGF-β分泌,从而抑制 NIS 表达,降低甲状腺滤泡细胞的摄碘能力,增加甲状腺癌的恶性程度[15]。然而,BRAF T1799A基因突变与 TGF-β异常表达之间的联系存在争议。Eloy[16]等学者研究结果显示,TGF-β在非局限性 PTC 中的表达较局限性肿瘤组织中明显升高,而这种影响与 BRAF基因突变无相关性。本研究旨在证实 BRAF T1799A 基因突变与 TGF-β之间的关联,验证二者是否共同作用于 NIS 而影响肿瘤预后。
 
2 材料与方法
 
2.1 研究对象与标本来源
收集2014年1月至2014年6月在青岛大学附属医院行手术治疗的甲状腺乳头状癌患者的术后新鲜病理组织80例,所有患者均为初发,且未接受放射治疗。标本经病理证实,并在离体后1h内置-80℃低温冰箱中保存。标本采集得到医院和患者的知情同意,不影响今后的诊断和治疗。采用北京艾德莱生物科技有限公司提供的组织/细胞 DNA 快速提取试剂盒提取DNA,具体操作步骤如下:(1)从-80℃冰箱中取出冻存管中的甲状腺新鲜病理组织,用解剖刀切成小碎块,后取 30-50mg,转入装有 180ul 组织裂解液 TL 的 1.5ml 离心管中,吹打混匀。(2)加入 20ul 蛋白酶 K 溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。(3)将裂解物放置在 55℃水浴 1 小时,期间数次振荡帮助裂解。(4)加入 200ul 结合液 CB,振荡混匀,70℃放置 10min。(5)冷却后加 100ul 异丙醇,振荡,可见絮状物。(6)将 1ml 混合液加入吸附柱 AC 中,13000rpm 离心 60s,倒掉收集管中的废液。(7)加入 500ul 抑制物去除液 IR,12000rpm 离心 30s,弃废液。(8)加入 700ul 漂洗液 WB,12000rpm 离心 30s,弃废液,再加入 500ul 漂洗液 WB,12000rpm 离心 30s,弃废液。(9)将吸附柱 AC 放回空收集管中,13000rpm 离心 2 分钟,去除漂洗液。(10)取出吸附柱 AC,放入一个干净离心管中,在吸附膜中央加入 100ul 洗脱缓冲液 EB,室温放置 5min,12000rpm 离心 1min,将得到的溶液重新加入离心吸附柱,室温放置 2min,12000rpm 离心 1min。(11)DNA 存放 4℃冰箱,以备基因电泳及测序。
........
 
第二部分 BRAFT1799A 基因突变与 TGFβ信号通路之间的关联1前言............21
2材料与方法...........23
2.1研究标本............23
2.2实验试剂、仪器.............23
2.3实验方法............24
2.4统计分析............28
3结果............29
3.1TβR-II、Vimintin、E-cadherin mRNA 的表达...........29
3.2TGF-β与TβR-II、Vimentin、E-cadherin mRNA表达的关联.........30
3.3BRAFT1799A 基因突变与 TβR-II、Vimentin、E-cadherin mRNA 表达的关联...........31
3.4BRAF及TGF-β表达对TβR-II、Vimentin、E-cadherin mRNA表达的影响.......31
3.5TGF-β与 TβR-II、Vimentin、E-cadherin 蛋白表达的关联.............32
3.6BRAF T1799A基因突变与TβR-II、Vimentin、E-cadherin 蛋白表达的关联.....33
3.7细胞内抑制MAPK后Vimentin、E-cadherin蛋白的表达.............34
4讨论............36
 
4 讨论
 
TGF-β是由多种细胞分泌的具有多重生物学效应的细胞因子,主要通过激活Smad通路来实现其促进胚胎生长发育、调节免疫、生长抑制、创伤修复、促进血管生成和细胞外基质沉积等生物学效应。目前已经发现近十种Smad分子。 在TGF-β/Smad 信号通路激活过程中,TGF-β 先与细胞膜表面受体 TβRⅡ结合形成复合物,然后募集并激活受体 TβRⅠ,从而诱导 Smad2/3 的 C 端丝氨酸的磷酸化,活化后的 Smad2/3 可以与 Smad4 形成复合物并进入细胞核[53]。复合物与靶基因启动子结合,完成对基因转录的调控作用。多种转录共激活因子和转录共抑制因子与Smads直接结合,从而协同参与Smads与基因启动子的结合以及对基因转录的调控[54]。同一TGF-β信号在不同的细胞或同一细胞的不同状态时会诱导不同的反应,这些是由细胞及亚型的不同和所处的状态不同引起的[55],其具体机制尚不明了。TGF-β信号通路的正常转导对肿瘤的发生具有抑制作用,主要源于对细胞周期的阻滞作用[56],通过对细胞周期素( cyclin)、细胞周期素依赖激酶(CDK)、细胞周期素依赖激酶抑制因子(CKI)以及c-myc的表达水平及功能状态进行调控,使细胞停滞在G1期。TGF-β能降低G1期细胞cyclins和CDKs的活性与表达水平,亦可通过诱导CKIs的表达来实现细胞周期的阻滞作用;原癌基因c-myc是促进细胞从G1到S期进程的转录激活因子,TGF-β在多数细胞中还能通过下调c-myc的表达而达到对细胞生长的抑制[57]。肿瘤细胞和肿瘤内的基质细胞经常会提高TGF-β表达量,随着TGF-β表达量的增加,肿瘤细胞对TGF-β的抑制作用产生抵抗,变得更加具有侵袭性并且向远处器官转移[58]。TβRⅡ的突变失活可能是是肿瘤TGF-β 生长抑制信号应答抵抗的原因之一。在TβRⅡ突变的结肠癌细胞系 SW48 中,转染野生型的 TβRⅡ可以抑制细胞增殖以及其恶性表型,提示 TβRⅡ是一个抑癌基因,在介导TGF-β 生长抑制信号通路过程中必不可少[59]。
.........
 
结 论
 
1、在甲状腺乳头状癌中,无论是转录水平还是蛋白水平,TGF-β的表达与 BRAFT1799A 突变无相关性。
2、BRAF T1799A 基因突变和 TGF-β高表达均可影响肿瘤预后,其加和作用远大于单一因素。
3、BRAF T1799A 和 TGF-β并非通过抑制 NIS 的表达而影响肿瘤预后。
4、BRAF T1799A 基因突变的肿瘤中 EMT 活性增强。
5、BRAF T1799A 基因突变参与了 TGF-β/非 Smad 通路致 EMT 的过程,且作为催化剂与 TGF-β共同影响肿瘤预后。
..........
参考文献(略)
发布写论文需求
发布发表需求
发布发表转让

无忧论文网 网站公告

[无忧论文网]是专业论文写作润色及发表论文网站,提供论文精简,论文写作,专业辅导写职称论文,专业辅导写毕业论文,专业辅导写留学生论文等。
100%品质,100%通过,是您写作的理想合作网站。我们的客户风雨同舟,帮广大客户解决各类写作和发表难题。